近年来，随着检测技术的不断发展，ctDNA液态活检已成为一种新兴技术，相比于组织活检，液体活检具有克服肿瘤异质性，取样便捷（血浆、脑脊液、胸腹水、尿液等）等优势，并且也能够检测包括基因突变、基因重排、拷贝数变异等不同类型的突变。目前，在成人淋巴瘤的研究中已经积累了较多的研究数据。对于血管内大B细胞淋巴瘤、原发中枢淋巴瘤这种较难获得活检组织样本淋巴瘤亚型，可以采用ctDNA检测来辅助诊断。

一项关于成人弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）液态活检的研究显示，与组织金标准相比，血浆ctDNA检测突变的灵敏度高达82.8%。与影像学检查相比，ctDNA的高灵敏度检测可以提前发现复发、微小残留病（MRD）监测以及耐药机制探究。另外一项研究通过对217名成人DLBCL患者的血浆样本进行ctDNA动态检测的研究发现，越早到达早期分子反应（EMR）或者主要分子反应（MMR）患者的无事件生存期（EFS）和总生存期（OS）越好，说明ctDNA检测可以提示预后。另外，对于PCNSL患者，使用脑脊液ctDNA进行检测，可以帮临床医生提前识别中枢侵犯的患者。

儿童和青少年淋巴瘤的发病机制和病理类型等方面与成人淋巴瘤有差异，在2016年British Journal of Haematology期刊上有一篇综述总结分子遗传异常在非霍奇金淋巴瘤（NHL）中普遍存在，与肿瘤发病机制分型、预后、治疗相关。但大多数B-NHL和T-NHL的分子遗传学研究都是在成人患者样本中进行的，其中许多结果在儿童、青少年NHL是否相同仍有待证实。例如，双打击或三打击淋巴瘤在成人淋巴瘤中是预后不良因素，在儿童淋巴瘤中极少发生；非GCB亚型在成人DLBCL中预后差，而儿童非GCB亚型和GCB亚型DLBCL的预后无差别。文章强调了关于年轻NHL患者遗传学特征，也指明与成人NHL研究仍然存在的差距，仍需开展更多的研究，以帮助预测年轻NHL患者预后和指导未来的治疗。

目前，ctDNA检测在儿童淋巴瘤中已有初步探索结果，国际上有研究探索了血浆ctDNA检测在儿童经典型霍奇金淋巴瘤（HL）致病机制和监测治疗反应中的价值，在72例患者外周血样本中鉴定肿瘤细胞来源的基因变异结果显示，以SOCS1基因最为常见，以JAK/STAT、NFkB、PI3K信号通路异常为主。

虽然儿童HL和儿童NHL在经过标准治疗后的OS率可高达80%-90%以上，总体预后较好，但仍有部分患者复发/难治，多数复发难治儿童淋巴瘤患者预后差。目前，国内外ctDNA在儿童淋巴瘤的研究数据较少，ctDNA检测在儿童淋巴瘤中可行性和临床价值尚未阐明。尚无中国儿童淋巴瘤的突变图谱数据；ctDNA在儿童淋巴瘤疗效判断方面的价值，采用ctDNA检测技术是否能比影像学检查提前识别复发难治患者，进行提前干预治疗，来进一步提高复发难治患者的预后；ctDNA监测能否发现耐药机制；以及是否通过ctDNA检测来帮助儿童淋巴瘤进行更好的预后分层等，都需要开展前瞻性临床研究来证实。基于此。中山大学肿瘤防治中心开展儿童淋巴瘤ctDNA动态监测前瞻性研究，通过纳入更多的儿童淋巴瘤患者来探究ctNDA在中国儿童淋巴瘤患者中的实际应用价值。

中山大学肿瘤防治中心从2019年开始开展ctDNA在儿童淋巴瘤中动态监测的临床研究（NCT4957901），目前已经有十余家中心、160多例儿童淋巴瘤患者入组，主要包括Burkitt淋巴瘤、DLBCL、淋巴母细胞淋巴瘤，另外还有少数间变大细胞淋巴瘤、NK/T细胞淋巴瘤、HL等。

这次入选2021年ASH会议壁报展示的研究中，纳入了53例初诊儿童成熟B-NHL患者，包括35例Burkitt淋巴瘤，18例DLBCL或高级别B细胞淋巴瘤(DLBCL/HGBCL)。收集初诊患者的石蜡包埋组织(FFPE)以及治疗前、治疗中和治疗后的血浆样本，采用475个基因的大panel对初诊儿童淋巴瘤的血标本进行动态监测。本研究探索了儿童成熟B细胞淋巴瘤的基因图谱，在38份基线组织和31份基线血浆样本中检测到的top5基因分别是MYC(71%)、DDX3X(45%)、ID3(42%)、TP53(40%)、SMARCA4(29%)和MYC(52%)、DDX3X(45%)、ID3(42%)、TP53(36%)、GNA13(23%)。研究发现在血浆中，突变丰度较高的基因有MYC、DDX3X、ID3、TP53、SMARCA4、ARID1A，表明这些基因可能是肿瘤早期的起源，ctDNA高频突变基因与组织样本高度一致，提示血浆样本可以反映儿童成熟B-NHL的突变特征。

本研究显示，基线血浆检出阳性率高，未经治疗的患者基线血浆可以100%检出肿瘤特有突变，ctDNA的丰度与临床因素（分期、危险度分层、LDH水平）显著相关。ctDNA动态监测与肿瘤负荷和临床疗效基本一致，6例初诊时接受手术切除病灶的患者接受基线ctDNA检测，4例患者ctDNA结果阴性（其中3例患者术后PET/CT未见肿瘤残留，1例患者PET/CT怀疑少许肿瘤残留），提示初诊时ctDNA结果能反映手术切除病灶的情况。

研究还对37例成熟B-NHL患者进行临床随访追踪和ctDNA结果分析，中位随访182天，33例患者完成抗肿瘤治疗，27例患者在结束治疗后进行了PET-CT检查，其中20例患者同步进行ctDNA检测。20例患者中有4例患者PET/CT提示肿瘤残留，这4例患者ctDNA均未检测到突变。4例患者中3例患者行残留病灶活检，病理均未见肿瘤，另一例患者残留灶无法手术或活检，定期随访，1个月后肿瘤复发。截至末次随访，所有53例患者均存活。

本研究结果提示，在儿童成熟B-NHL中，血浆ctDNA动态监测可反映儿童成熟B-NHL患者的突变特征，并能发现组织中未检查到的基因突变，可作为组织样本的补充。ctDNA的突变丰度与肿瘤负荷、临床分期和危险度相关。在监测肿瘤残留灶方面，ctDNA结果与残留灶病理结果一致性好，在判断肿瘤残留方面有较高价值。

该研究目前仍在入组随访阶段，期待更多的研究数据进一步探究ctDNA动态监测在儿童淋巴瘤中的预后价值、复发耐药机制，完善中国儿童淋巴瘤的分子特征，希望能从分子层面进一步细化儿童淋巴瘤的预后分层，以推动更精准的个体化治疗。

从目前的研究数据和临床实践来看，基于ctDNA的液态活检在肿瘤诊疗中有着广泛的应用，ctDNA检测技术包括RT-PCR，ddPCR，NGS已成为现在研究的主流技术。NGS技术以高灵敏度、高特异性和高通量的优势在肿瘤基因组变异包括ctDNA检测这块应用这块日益增长。随着研究的深入，也暴露了一些不足之处。

首先是能否提供更好的灵敏度，特别是在肿瘤MRD的研究方面。技术层面以增加测序深度来提高技术灵敏度的同时，会带来大量的背景噪音，如何从这个噪音中识别出肿瘤来源的变异，是目前的技术难点。

其次，如何排除克隆性造血突变。随着年龄的增长，生理上健康的组织，比如皮肤、结肠、食管和血液会累积癌症相关的基因突变。在血液中，这种现象称为克隆性造血。这些变异也会在cfDNA中被检测到，如何进行区分也是目前亟待解决的问题。

目前的研究多为观察性研究，虽然对ctDNA在临床的应用前景进行了广泛的研究和讨论，肺癌中药物临床研究有根据ctDNA检测结果进行药物指导的研究，不劣于组织检测结果的指导作用，也有研究报道基于ctDNA结果可以提高临床试验的筛选时间，提高入组率，但在淋巴瘤领域仍缺乏干预性研究的结果。另外，ctDNA检测是一个DNA层面的信息集合，可以检测变异、扩增、融合、突变等信息，但不具有表达、修饰、转录层面的信息。希望未来可以把ctDNA及表达、修饰、转录等相关检测融合在一起，更好地服务于患者的精准诊疗。